關(guān)于植物檢測(cè)試劑盒的使用與結(jié)果判斷，我有妙招
瀏覽次數(shù)：718發(fā)布日期：2019-07-08
自備材料：
植物根莖、葉子等；剪刀；螺蓋離心管或鎖蓋離心管或96孔板；1ml玻璃比色皿；分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀；水浴鍋或干浴器；離心機(jī)
植物檢測(cè)試劑盒操作步驟：
1、 樣本處理：
取新鮮植物組織，清洗干凈，擦干，剪碎，迅速稱取， 按照20mg重量加入1ml Pro裂解液的比例加入Pro裂解液（建議使用1.5ml螺口離心管或鎖蓋離心管），沸水浴或干浴處理20分鐘 (期間間歇混勻)，10000rpm離心 2分鐘，上清即為脯氨酸提取液，4℃保存?zhèn)溆?。待測(cè)提取液如不能及時(shí)測(cè)定，應(yīng)置于-20℃保存，1-2天內(nèi)穩(wěn)定。
2、 Pro顯色液的配制：
把小管裝的茚三酮粉末，全部加入到茚三酮溶解液中，劇烈混勻至*溶解，即配成Pro顯色液。注意：Pro顯色液具有一定腐蝕性，請(qǐng)小心操作。
3、 配制系列脯氨酸標(biāo)準(zhǔn)溶液：
取1ml 試劑1-Pro裂解液全部加入到裝有Pro標(biāo)準(zhǔn)液的小管中，混勻后*溶解，即配成的Pro標(biāo)準(zhǔn)液（100mg/ml）。
取1 μl 100mg/ml 標(biāo)準(zhǔn)液加入到1ml Pro裂解液中，即配成100μg/ml Pro標(biāo)準(zhǔn)液待用。參照下表配制1-6號(hào)不同濃度的Pro標(biāo)準(zhǔn)溶液。
1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶，洗滌時(shí)不影響結(jié)果。
2.各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性，以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間控制在5分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。
3.請(qǐng)每次測(cè)定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線，做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過高（樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔孔的OD值），請(qǐng)先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測(cè)定，計(jì)算時(shí)請(qǐng)zui后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）。
4.封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
5.底物請(qǐng)避光保存。
6.嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行，試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn)。
7.所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。
8.本試劑不同批號(hào)組分不得混用。
10.如與英文說明書有異，以英文說明書為準(zhǔn)。
ELISA檢測(cè)試劑盒實(shí)驗(yàn)結(jié)果判斷：
1、定量測(cè)定結(jié)果根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中待測(cè)物的含量。
2、以樣品孔的OD值大于陰性對(duì)照OD值+2～3SD，作為陽性結(jié)果的閾值。
3、以P／N值(陽性孔OD值／陰性孔OD值)大于或等于2．1為陽性，P／N值小于2．1，但大于1．5為可疑，P／N小于1．5為陰性。
4、ELISA試劑盒目測(cè)定性法：加入底物經(jīng)酶解和終止反應(yīng)后，肉眼觀察陽性孔顏色明顯深于(競(jìng)爭(zhēng)法則淺于)陰性對(duì)照，與陰性對(duì)照的顏色接近者，判定為陰性。
與您分享常用不穩(wěn)定試劑的分類及要求：
① 易揮發(fā)、低燃點(diǎn)的試劑要密封，放于陰涼、通風(fēng)、遠(yuǎn)離火源處保存。
② 與水蒸氣，水發(fā)生反應(yīng)的物質(zhì)要密封，并遠(yuǎn)離水源保存。
③ 易與氧氣作用的試劑，應(yīng)將其固體或晶體密封保存，不宜長(zhǎng)期存放其水溶液，亞硫酸，氫硫酸溶液要密封存放，鉀，鈉，白磷更要采用液封形式。
④ 與二氧化碳反應(yīng)的物質(zhì)要密封保存，其相應(yīng)的溶液較固體更易反應(yīng)，所以更要注意密封保存。
⑤ 易揮發(fā)或自身分解的試劑要密封，放于陰涼通風(fēng)處保存。
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