單克隆抗體怎么制備？有哪些功能？
瀏覽次數(shù)：745發(fā)布日期：2019-08-09
單克隆抗體的分類：
以細(xì)胞融合為基礎(chǔ)的鼠雜交瘤技術(shù)的發(fā)展，使得人們能夠大量獲取高親和性和強(qiáng)特異性的鼠單克隆抗體(McAb)，McAb在理論和實(shí)踐上的應(yīng)用成為解決生物學(xué)和醫(yī)學(xué)等許多重大問題的重要手段。但是鼠源性單抗應(yīng)用于人類的臨床應(yīng)用結(jié)果反映出了單克隆抗體藥物存在的一些問題：
鼠源性單抗容易容易產(chǎn)生人抗鼠抗體(HAMA) ,在體內(nèi)作為異源蛋白被清除掉，從而削弱其治療的有效性。
鼠源性單抗在人體內(nèi)生物活性降低，其Fc段不能有效激活人體FcRn及補(bǔ)體系統(tǒng)的效應(yīng)功能。
鼠源性單抗在人體內(nèi)的半衰期短，因而降低了其療效。
因此，人們一直致力于人源性抗體的研究，鼠抗體人源化就是通過基因改造，使其和人體內(nèi)的抗體分子具有極其相似的輪廓，從而逃避人免疫系統(tǒng)的識(shí)別，避免誘導(dǎo)HAMA（人抗鼠抗體）反應(yīng)。進(jìn)行抗體的人源化有兩個(gè)基本原則：保持或提高抗體的親和力和特異性；大大降低或基本消除抗體的免疫原性。人源化有多種方案，都必須遵循這兩個(gè)原則，尤其不能喪失抗體特異結(jié)合的能力。
抗體的結(jié)構(gòu)與功能
1、抗原：進(jìn)入動(dòng)物體內(nèi)對(duì)肌體的免疫系統(tǒng)產(chǎn)生刺激作用的外源物質(zhì)。
包括：蛋白質(zhì)、多糖、核酸、病毒、細(xì)菌、各種細(xì)胞等。
特點(diǎn)：外源性、結(jié)構(gòu)性（分子表面具有穩(wěn)定的環(huán)狀結(jié)構(gòu)基團(tuán)作為識(shí)別位點(diǎn)）、特異性（抗原與抗體的反應(yīng)）。
2抗體
動(dòng)物免疫系統(tǒng)分泌的中和或消除抗原物質(zhì)的影響的糖蛋白，存在于血清中，本質(zhì)是免疫球蛋白（Immuniglobulin,Ig）。
動(dòng)物脾臟有上百萬個(gè)B淋巴 細(xì)胞，一個(gè)細(xì)胞就是一個(gè)克隆，它針對(duì)抗原上的一個(gè)抗原決定族產(chǎn)生的抗體是單克隆抗體。
一種抗原通常具有多個(gè)不同的抗原決定族，因此能刺激多個(gè)B淋巴細(xì)胞產(chǎn)生相應(yīng)的單克隆抗體，因此血清中的抗體是針對(duì)不同抗原決定族的單克隆抗體混合物，稱為多克隆抗體。
動(dòng)物免疫與親本細(xì)胞的選擇
細(xì)胞融合：淋巴細(xì)胞雜交瘤的制備
雜交瘤細(xì)胞的篩選：有限稀釋法等
單克隆抗體的制備和凍存
單克隆抗體的純化
親本細(xì)胞的選擇
骨髓瘤細(xì)胞：一般不分泌抗體，能在體外無限繁殖和連續(xù)繼代培養(yǎng)，且為HPRT－（次黃嘌呤鳥嘌呤磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶）或TK－（胸腺嘧啶核苷激酶） 。多用BALB/C 小鼠的骨髓瘤細(xì)胞。[小鼠骨髓瘤細(xì)胞能在體外無限增殖傳代并不分泌抗體。腫瘤細(xì)胞DNA生物合成有兩條途徑：一條由糖、氨基酸合成核苷酸，進(jìn)而合成DNA，這是主要途徑。這條途徑可被葉酸的拮抗物—氨基喋呤(A)所阻斷(但如果培養(yǎng)基中含核苷酸“前體“次黃嘌呤和胸腺嘧啶核苷，即便有A存在，細(xì)胞通過另一途徑(稱替代途徑或應(yīng)急途徑)也可合成核苷酸。但后一途徑需次黃嘌呤鳥嘌呤磷酸核糖轉(zhuǎn)化酶(HGPRT)和胸腺嘧啶核苷激酶 (TK)存在)。]
淋巴細(xì)胞：經(jīng)過免疫處理的淋巴細(xì)胞，多用大鼠或小鼠。
免疫方法：對(duì)細(xì)胞或微生物抗原可直接注射如小鼠體內(nèi)，可溶性蛋白抗原可與等量的福氏*佐劑混合乳化后，注入到動(dòng)物體內(nèi)。
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