植物直接PCR試劑盒兩種操作方法滿足不同需求
瀏覽次數(shù)：850發(fā)布日期：2019-11-09
植物直接PCR試劑盒包含基因工程改造DNA聚合酶和高度優(yōu)化的緩沖，特別適合從被抑制劑污染的材料中進(jìn)行PCR擴(kuò)增，亦可直接從植物材料中擴(kuò)增目的基因片段，如葉片等。從植物來源DNA樣品或直接從植物材料中擴(kuò)增，面臨很大的困難，因為樣品中含有很多未知的抑制因子，可以一直DNA聚合酶的活性。
植物直接PCR試劑盒是一款可直接對不同類型植物葉片進(jìn)行PCR擴(kuò)增的試劑盒，適應(yīng)性廣、穩(wěn)定性強(qiáng)。其采用*的裂解緩沖液體系，可以快速的裂解多種植物樣品并釋放出基因組DNA，不需要除去蛋白、RNA或次生代謝產(chǎn)物等，即可將釋放出的基因組DNA作為模板直接用于PCR反應(yīng)。此外，樣品使用量少，低至1 mg植物葉片即可進(jìn)行實(shí)驗。
植物直接PCR試劑盒中提供的2×Plant Master Mix具有很強(qiáng)的擴(kuò)增兼容性，能直接以待測樣品裂解液為模板，進(jìn)行特異性擴(kuò)增。該試劑為2倍濃縮PCR反應(yīng)混合液，包含了用于PCR擴(kuò)增除模板和引物外的所有組分，大大簡化操作過程，降低污染幾率。
本試劑盒根據(jù)不同實(shí)驗需求提供了兩種操作方法。直接法僅需要將一小片植物組織加入PCR反應(yīng)體系即可；裂解法則是將少量含有植物組織的裂解產(chǎn)物加入PCR反應(yīng)體系。其中，裂解法適合目的片段較長，擴(kuò)增難度較大，以及需要對同一樣本進(jìn)行多次PCR擴(kuò)增的實(shí)驗。
直接法：
1.在200μL離心管中加入相應(yīng)的2×Plant Master Mix，再添加對應(yīng)的引物，并用ddH2O使其稀釋1×
2.剪取1-2 mg葉片碎塊（直徑2-3 mm）加入配置好的1×PCR反應(yīng)體系。
3.根據(jù)優(yōu)化好的PCR條件（退火溫度等）進(jìn)行PCR反應(yīng)。
4.瓊脂糖凝膠電泳檢測結(jié)果。
裂解法：
1.取3-5 mg葉片（直徑5-7 mm）組織，置于200μL或1.5 mL離心管中。
2.在離心管中加入50μL Buffer P1，確保裂解液能夠*浸沒葉片組織。
3.蓋好離心管蓋，95℃處理10 min。
4.加入50μL Buffer P2，用微量移液器吹打或者渦旋混勻。
5.所得裂解液可4℃保存（5天）或-20℃長期保存或直接用于PCR擴(kuò)增。
注意事項：
1.本試劑盒只適合于多糖多酚含量低的植物葉片樣本，如小麥、水稻、煙草、玉米、大豆、油菜等。不適合多糖多酚含量高的植物樣本。
2.建議使用新鮮采取的葉片組織，若為長期冷凍組織，應(yīng)盡量避免反復(fù)凍融，否則會導(dǎo)致模板的降解，影響PCR效率。葉片組織以幼嫩為宜，若為成熟的葉片，避免使用葉片主脈部位組織。
3.電泳檢測時，切勿使用含有SDS的Loading Buffer。否則，電泳時會在泳道中出現(xiàn)一大團(tuán)拖尾亮帶，影響實(shí)驗結(jié)果。
4.建議擴(kuò)增片段長度1 kb以內(nèi)，以便擴(kuò)增效率*。
5.為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗服并佩戴一次性手套操作。
主要應(yīng)用：
l)可從粗提或含有抑制劑的DNA模板中強(qiáng)力擴(kuò)增目的基因；
2)直接從葉片，壓碎種子和其他植物組織中PCR擴(kuò)增目的基因；
3)快速檢測轉(zhuǎn)基因（GMO）的植物；
4)植物育種和轉(zhuǎn)基因?qū)嶒灥目焖俸唵魏Y選。
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