實(shí)時(shí)熒光定量PCR在實(shí)驗(yàn)中需注意以下事項(xiàng)
瀏覽次數(shù)：840發(fā)布日期：2020-06-22
實(shí)時(shí)熒光定量PCR是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程，Zui后通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法。實(shí)時(shí)熒光定量PCR的化學(xué)原理包括探針類和非探針類兩類，探針類是利用與靶細(xì)胞序列特異性雜交的探針來(lái)指示擴(kuò)增產(chǎn)物的增加，非探針類是利用熒光染料或者特異性設(shè)計(jì)的引物來(lái)指示擴(kuò)增的增加。運(yùn)用該技術(shù)可以對(duì)DNA、RNA樣品進(jìn)行定量（包括定量和相對(duì)定量）和定性分析。
技術(shù)特點(diǎn)：
1、準(zhǔn)確可靠，臨床雙盲對(duì)照試驗(yàn)＞1000例，結(jié)果與金標(biāo)準(zhǔn)測(cè)序法比對(duì)，結(jié)果一致性大于99%。
2、高靈敏：可檢測(cè)低至10ng的人基因組DNA。
3、快速：整個(gè)檢測(cè)流程只需3小時(shí)。
4、簡(jiǎn)便：試劑盒提供預(yù)混好的試劑，產(chǎn)品僅用于科研實(shí)驗(yàn)使體系配置操作簡(jiǎn)便。
5、防污染
6、高特異性：雙重特異性組成，保證檢測(cè)結(jié)果的特異性和準(zhǔn)確性引物與DNA互補(bǔ)鏈結(jié)合必需*配對(duì)，才能延伸。探針特異性與所檢測(cè)基因的PCR產(chǎn)物配對(duì)，在延伸中產(chǎn)生熒光。
1、RT-PCR可以檢測(cè)組織、細(xì)胞、血液、細(xì)菌等很多材料，不同的樣本有不同要求，實(shí)驗(yàn)前請(qǐng)充分溝通確認(rèn)實(shí)驗(yàn)方案和樣本情況；
2、客戶盡可能提供實(shí)驗(yàn)的背景信息、物種、基因準(zhǔn)確的名稱和ID號(hào)；
3、客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。
4、樣本保存于液氮或干冰，也可以保存于Trizol液中。
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