
植物檢測試劑盒樣本處理:
取新鮮植物組織,清洗干凈,擦干,剪碎,迅速稱取, 按照20mg重量加入1ml Pro裂解液的比例加入Pro裂解液(建議使用1.5ml螺口離心管或鎖蓋離心管),沸水浴或干浴處理20分鐘 (期間間歇混勻),10000rpm離心 2分鐘,上清即為脯氨酸提取液,4℃保存?zhèn)溆?。待測提取液如不能及時測定,應(yīng)置于-20℃保存,1-2天內(nèi)穩(wěn)定。
植物檢測試劑盒操作步驟:
一、粗酶液提?。?/strong>
按照質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為 1:5~10 的比例(建議稱取約 0.1g,加入 1mL 提取液)加入提取液,室溫勻漿后于 25℃,12000g 離心 10min,取上清待測。
二、測定步驟:
1、 分光光度計(jì)預(yù)熱 30min 以上,調(diào)節(jié)波長 570nm,蒸餾水調(diào)零。
2、 將 1000μg/mL 氮標(biāo)準(zhǔn)液用提取液分別稀釋為 200、100、50、25、12.5μg/mL。
3、 操作表:
混勻后蓋緊瓶蓋封口膜封口(防止水分散失),置于沸水浴中保溫 10 min,冷卻后反復(fù)顛倒 EP管數(shù)次,將測定管 8000rpm 離心 5min 后取上清,于 570nm 測定吸光值。顯色后務(wù)必在 30min 內(nèi)測完。計(jì)算△A=A 測定管-A 空白管,△A 標(biāo)準(zhǔn)=A 標(biāo)準(zhǔn)管-A 空白管。
三、植物氨態(tài)氮含量計(jì)算:
1、標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制
以各個氮標(biāo)準(zhǔn)液為橫坐標(biāo),其對應(yīng)的△A 標(biāo)準(zhǔn)為縱坐標(biāo),建立標(biāo)準(zhǔn)曲線,得到標(biāo)準(zhǔn)方程 y=kx+b,將△A 帶入方程中,得到 x (µg/mL)
2、NH3-N 含量的計(jì)算
(1)按樣本鮮重計(jì)算
NH3-N 含量(µg /g FW)=x×V 提取÷W= x÷W。
(2)按蛋白濃度計(jì)算
NH3-N 含量(µg/mg prot)=x×V 提取÷(Cpr×V 提?。? x÷Cpr。
W:樣品質(zhì)量,g;
Cpr:蛋白濃度,mg/mL;
V 提?。簶悠诽崛∫嚎傮w積,1mL。