詳細(xì)分析酵母菌落直接PCR檢測(cè)試劑盒的優(yōu)勢(shì)和操作步驟
瀏覽次數(shù)：714發(fā)布日期：2021-07-24
酵母菌落直接PCR檢測(cè)試劑盒主要用于酵母單雜pAbAi質(zhì)粒重組基因組后的鑒定實(shí)驗(yàn)，同時(shí)提供PCR Mix以及通用引物混合物，無(wú)需額外準(zhǔn)備，可快速高效完成PCR擴(kuò)增，產(chǎn)物可用于DNA測(cè)序。亦適用于其它重組酵母菌的PCR檢測(cè)實(shí)驗(yàn)。如需檢測(cè)的樣品為游離質(zhì)粒而非基因組重組質(zhì)粒，建議使用陽(yáng)性克隆檢測(cè)試劑盒（SK2420）進(jìn)行PCR擴(kuò)增。
酵母菌落直接PCR檢測(cè)試劑盒的優(yōu)勢(shì)：
1、特異性：所有產(chǎn)品使用的引物均經(jīng)過(guò)詳盡的生物信息學(xué)分析，經(jīng)過(guò)GenBank及自建龐大數(shù)據(jù)庫(kù)的比對(duì)，確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區(qū)段，可實(shí)現(xiàn)對(duì)細(xì)菌種屬及血清型的特異檢測(cè)。
2、重現(xiàn)性：該系列所有產(chǎn)品均經(jīng)過(guò)大量實(shí)驗(yàn)菌株的驗(yàn)證。
3、靈敏性：該系列產(chǎn)品可實(shí)現(xiàn)對(duì)檢測(cè)菌的高靈敏檢測(cè)，當(dāng)樣品中細(xì)菌的濃度達(dá)到103cfu/ml時(shí)，可實(shí)現(xiàn)對(duì)其的直接檢測(cè)，無(wú)需繁瑣的增菌過(guò)程。
4、實(shí)用性：檢測(cè)范圍廣，涵蓋了對(duì)人體危害較為嚴(yán)重的17種呼吸道及腸道致病菌，可實(shí)現(xiàn)對(duì)臨床樣品及其他環(huán)境取樣的快速檢測(cè)，整個(gè)檢測(cè)過(guò)程為3-4個(gè)小時(shí)。
操作步驟：
1、準(zhǔn)備PCR預(yù)混液：根據(jù)檢測(cè)克隆數(shù)，等比例擴(kuò)大配制體積。
2、吸取5μL酵母快速裂解液加入PCR管中。
3、用無(wú)菌牙簽或10μL槍頭刮取適量酵母菌落（直徑1-2mm）懸浮在裂解液中。
4、吹打或者震蕩混勻后室溫靜置5 min。即為裂解產(chǎn)物。
注意：大于2000bp的基因片段作為Bait，建議將裂解產(chǎn)物再于-20℃冷凍10min或-80℃速凍1min，可有效提高PCR產(chǎn)率。
5、在裂解產(chǎn)物中加入45μL PCR預(yù)混液（含引物），PCR擴(kuò)增。
注意事項(xiàng)：
1、菌落PCR前，先刮取部分菌落保存，可以有效避免樣品污染和丟失。
2、新鮮菌落的PCR成功率接近100%。如生長(zhǎng)期較長(zhǎng)的菌落，請(qǐng)先進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)。
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