原代細(xì)胞的傳代操作過程
瀏覽次數(shù)：2944發(fā)布日期：2025-04-21
原代細(xì)胞是指從機(jī)體的組織(如人組織、小鼠組織、大鼠組織和兔組織等)經(jīng)蛋白酶或其它的方法獲得單個(gè)細(xì)胞并在體外進(jìn)行模擬機(jī)體培養(yǎng)的 細(xì)胞，稱為原代細(xì)胞。
原代培養(yǎng)原理將動(dòng)物機(jī)體的各種組織從機(jī)體中取出，經(jīng)各種酶(常用胰蛋白酶)、螯合劑(常用EDTA)或機(jī)械方法處理，分散成單細(xì)胞，置合適的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，使細(xì)胞得以生存、生長(zhǎng)和繁殖，這一過程稱原代培養(yǎng)。
一般認(rèn)為，培養(yǎng)的原代的第1代細(xì)胞和傳代到第10代以內(nèi)的細(xì)胞統(tǒng)稱為原代細(xì)抱培養(yǎng)。在人工條件下使其原代細(xì)胞生存、生長(zhǎng)、繁殖和傳代，進(jìn)行細(xì)胞生命過程、細(xì)胞瘍變、細(xì)胞工程等問題的研究。
那么關(guān)于原代細(xì)胞的傳代培養(yǎng)，一般有以下兩種方法，具體操作步驟：
一、貼壁細(xì)胞的消化法傳代
1、吸除或倒掉瓶?jī)?nèi)舊培養(yǎng)液。
2、加入1ml左右消化液(胰蛋白鱷或與EDTA混合液)輕輕接動(dòng)培養(yǎng)瓶，使瓶底細(xì)胞都浸入溶液中.
3、消化2-5分鐘后把培養(yǎng)瓶放置在顯微鏡下進(jìn)行觀察，發(fā)現(xiàn)原貼壁的細(xì)胞逐漸趨于圓形，在還未漂起時(shí)，棄去消化液，加入培養(yǎng)液終止消化。
4、用吸管將貼壁的細(xì)胞吹打成懸液，分別接種到另外兩到三個(gè)培養(yǎng)瓶中，置37℃培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng).第二天觀察貼壁生長(zhǎng)情況。
二、懸浮細(xì)胞的傳代
1、直接傳代
①讓懸浮細(xì)胞慢慢沉淀在瓶底后，將上清吸掉1/2-2/3。
?、谟梦艽荡蛐纬杉?xì)胞懸液后，分別接種到另外兩到三個(gè)培養(yǎng)瓶中，置37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
2、離心法傳代
?、賹⒓?xì)胞連同培養(yǎng)液一并轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi)，離心800-1 OOOrpm, 5分鐘。
②去除上清，加新的培養(yǎng)液到離心管內(nèi)，用吸管吹打使之形成細(xì)胞懸液。
③將細(xì)胞懸液分別接種到另外兩到三個(gè)培養(yǎng)瓶中，置37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
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