
驗證ELISA試劑盒穩(wěn)定性的方法主要包括以下幾個方面:
一、加速穩(wěn)定性試驗
1、溫度模擬:
將試劑盒置于37℃環(huán)境中分別破壞24小時和72小時,模擬運輸或短期高溫條件下的穩(wěn)定性。
2、檢測指標:
l 回收率:在定值樣本中加入目標物(如IL-10),測定值與理論值的比率應在70%-130%范圍內。
l 線性:樣本倍比稀釋后(如1:2至1:16),測定值與理論值的比率需符合70%-130%的線性范圍。
l 精密度:批內變異系數(shù)(CV)應<10%,批間CV<12%。
二、長期穩(wěn)定性測試
1、儲存條件:按照說明書推薦的儲存條件(如2-8℃或-20℃)存儲試劑盒。
2、定期測試:在不同的時間點(如1個月、3個月、6個月)取出試劑盒,測試其性能,確保沒有顯著變化。
3、監(jiān)控標準曲線:記錄每次測試的標準曲線,觀察其線性和重復性是否保持一致。
三、批間一致性(Inter-Assay Precision)
1、不同批次的測定:使用多個批次的試劑盒,對同一中等濃度樣品進行測試。
2、比較結果:檢查不同批次之間結果的差異。
3、計算CV%:與批內一致性的方法相同。
4、理想結果:CV值應低于15%,表示良好的批間一致性。
四、批內一致性(Intra-Assay Precision)
1、多次測定同一樣品:選擇一個中等濃度的樣品,進行多次重復測試,通常是3次或更多。
2、計算變異系數(shù)(CV%):利用公式 , 來衡量重復性。
3、理想結果:CV值應低于10%,表示良好的批內一致性。
五、回收率測試
1、加標回收:在已知濃度的樣本中加入已知量的標準品,然后進行ELISA測試。
2、計算回收率:通過公式 , 來評估試劑盒的準確性。
3、理想結果:回收率應在80-120%之間。
六、注意事項
1、穩(wěn)定性差異:不同樣本(如感染患者白細胞)的穩(wěn)定時間可能不同,需針對性驗證。
2、試劑盒選擇:優(yōu)先選擇通過加速和長期穩(wěn)定性驗證的產品,并關注說明書中的穩(wěn)定性數(shù)據(jù)。
通過上述方法可全面評估ELISA試劑盒的穩(wěn)定性,確保其在有效期內和運輸過程中的性能可靠。