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蔗糖磷酸合成酶（SPS)測試盒（比色法）

  • 更新時間：  2023-10-14
  • 產(chǎn)品型號：  AS6321221
  • 簡單描述
  • 蔗糖磷酸合成酶（SPS)測試盒（比色法）不僅是重要的光合產(chǎn)物，也是植物體內(nèi)運輸?shù)闹饕镔|(zhì)，還是碳水化合物的貯存形式之一。SPS（EC 2.4.1.14）以果糖-6-磷酸為受體，形成的蔗糖磷酸在蔗糖磷酸酶的作用下形成蔗糖。一般把蔗糖磷酸酯合成酶-蔗糖磷酸酶系統(tǒng)看作是蔗糖合成的主要途徑。
詳細介紹

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貨號

產(chǎn)品名稱

規(guī)格

AS6321221

蔗糖磷酸合成酶（SPS)測試盒（比色法）

100管/48樣

AS6321221

蔗糖磷酸合成酶（SPS)測試盒（比色法）

50管/24樣

測定意義

蔗糖不僅是重要的光合產(chǎn)物，也是植物體內(nèi)運輸?shù)闹饕镔|(zhì)，還是碳水化合物的貯存形式之一。SPS（EC 2.4.1.14）以果糖-6-磷酸為受體，形成的蔗糖磷酸在蔗糖磷酸酶的作用下形成蔗糖。一般把蔗糖磷酸酯合成酶-蔗糖磷酸酶系統(tǒng)看作是蔗糖合成的主要途徑。

測定原理

蔗糖磷酸合成酶催化果糖-6-磷酸形成蔗糖磷酸，蔗糖磷酸與間苯二反應(yīng)可呈現(xiàn)顏色變化，在480nm下有特征吸收峰，酶活力大小與顏色的深淺成正比。

需自備的的儀器和用品

可見分光光度計/酶標儀、水浴鍋、離心機、移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰

試劑的組成和配制

提取液：液體100mL×1瓶，4℃保存；

試劑一：液體2.5mL×1瓶，-20℃保存；

試劑二：1000μg/mL蔗糖溶液10mL×1瓶，4℃保存；

試劑三：液體2mL×1瓶，4℃保存

試劑四：液體25mL×1瓶，4℃保存；

試劑五：液體6mL×1瓶，4℃避光保存；

樣品測定的準備： 

按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL提取液），進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。

測定步驟

  1. 分光光度計或酶標儀預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長至480nm，蒸餾水調(diào)零。

  2. 樣本測定，（在EP管中依次加入下列試劑）：

試劑名稱（μL）

測定管

對照管

標準管

空白管

樣本

10

10



蒸餾水


45

45

55

試劑二



10


試劑一

45




混勻，25℃準確水浴10min

 試劑三

15

15

15

15

沸水浴中煮沸10min左右（蓋緊，以防止水分散失），冷卻

試劑四

     210

     210

210

210

試劑五

     60

      60

60

60

混勻，沸水浴30min，冷卻后，取200μL 至微量石英比色皿或96孔板中，480nm下測定各管吸光值。標準管和空白管只要做一管。每個測定管需要設(shè)一個對照管。

SPS活力單位的計算

1、按照蛋白濃度計算

單位定義：每mg組織蛋白每分鐘催化產(chǎn)生1μg 蔗糖定義為一個酶活力單位。

SPS活性(μg /min/mg prot)= C標準管×V1×（A測定管-A對照管)÷（A標準管-A空白管)÷(V1×Cpr)÷T=100×（A測定管-A對照管)÷（A標準管-A空白管)÷Cpr

2、按照樣本鮮重計算

單位定義：每g組織每分鐘催化產(chǎn)生1μg 蔗糖定義為一個酶活力單位。

SPS活性(μg /min/g鮮重) = C標準管×V1×（A測定管-A對照管)÷（A標準管-A空白管)÷(W×V1÷V2)÷T=100×（A測定管-A對照管)÷（A標準管-A空白管)÷W

C標準管：標準管濃度，1000μg/mL；V1：加入反應(yīng)體系中樣本體積，0.01mL； V2：加入提取液體積，1mL；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本鮮重，g；T ：反應(yīng)時間：10min。

1.jpg


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