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α半乳糖苷酶(αGAL)測(cè)試盒(比色法)

  • 更新時(shí)間:  2023-10-14
  • 產(chǎn)品型號(hào):  AS6321244
  • 簡(jiǎn)單描述
  • α半乳糖苷酶(αGAL)測(cè)試盒(比色法)廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中,能專一地催化α半乳糖苷鍵的水解,主要參與棉子糖、水蘇糖、蜜二糖和半乳甘露聚糖等半乳糖苷的降解。
詳細(xì)介紹

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貨號(hào)

產(chǎn)品名稱

規(guī)格

AS6321244

α半乳糖苷酶(αGAL)測(cè)試盒(比色法)

100管/48樣

AS6321244

α半乳糖苷酶(αGAL)測(cè)試盒(比色法)

50管/24樣

測(cè)定意義:                           

α-GAL (EC 3.2.1.22)廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中,能專一地催化α半乳糖苷鍵的水解,主要參與棉子糖、水蘇糖、蜜二糖和半乳甘露聚糖等半乳糖苷的降解。α-GAL對(duì)于植物種子的萌發(fā)至關(guān)重要,種子萌發(fā)初期,其催化產(chǎn)生的D-半乳糖通過糖酵解途徑迅速轉(zhuǎn)化和消耗,為種子的萌發(fā)提供最初的能量來(lái)源,后期則主要參與細(xì)胞壁儲(chǔ)藏多糖水解。

測(cè)定原理:

α-GAL分解對(duì)-硝基苯-α-D-吡喃半乳糖苷生成對(duì)-硝基,后者在400nm有最大吸收峰,通過測(cè)定吸光值升高速率來(lái)計(jì)算α-GAL活性。

自備用品:

可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。

試劑組成和配制:

提取液:液體100mL×1瓶,4℃保存。

試劑一:粉劑×1瓶,-20℃保存;臨用前加入2.5mL蒸餾水,充分溶解備用;用不完的試劑仍-20℃保存。

試劑二:液體4mL×1瓶,4℃保存。

試劑三:液體13mL×1瓶,4℃保存。

粗酶液提?。?/p>

1、細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞:先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量(104個(gè)):提取液體積(mL)為500~1000:1的比例(建議500萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入1mL提取液),超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(冰浴,功率20%或200W,超聲3s,間隔10s,重復(fù)30次);15000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。

2、組織:按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL提取液),進(jìn)行冰浴勻漿。15000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。

測(cè)定步驟:

  1. 分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至400nm,蒸餾水調(diào)零。

2、樣本測(cè)定(在EP管或96孔板中依次加入下列試劑):

試劑名稱(μL)

測(cè)定管

對(duì)照管

試劑一

25


蒸餾水


25

試劑二

35

35

樣本

10

10

迅速混勻,放入37℃保溫30min

試劑三

130

130

充分混勻, 400nm處測(cè)定吸光值A(chǔ),計(jì)算ΔA=A測(cè)定-A對(duì)照。每個(gè)測(cè)定管需設(shè)一個(gè)對(duì)照管。

 

α-GAL活性計(jì)算:

a.用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下

標(biāo)準(zhǔn)條件下測(cè)定的回歸方程為y = 0.00585x -0.0027;x為標(biāo)準(zhǔn)品濃度(nmol/mL),y為吸光值。

(1)按樣本蛋白濃度計(jì)算:

單位的定義:每mg組織蛋白每分鐘產(chǎn)生1nmol對(duì)-硝基苯定義為一個(gè)酶活性單位。

α-GAL活性(nmol/min/mg prot)=[(ΔA+0.0027) ÷0.00585×V反總]÷(V樣×Cpr)÷T

=39.89×(ΔA+0.0027) ÷Cpr

(2)按樣本鮮重計(jì)算:

單位的定義:每g組織每分鐘產(chǎn)生1nmol對(duì)-硝基苯定義為一個(gè)酶活性單位。

α-GAL活性(nmol/min/g鮮重)=[(ΔA+0.0027)÷0.00585×V反總]÷(W×V樣÷V樣總)÷T

=39.89×(ΔA+0.0027) ÷W

(3)按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算:

單位的定義:每1萬(wàn)個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘產(chǎn)生1nmol對(duì)-硝基苯定義為一個(gè)酶活性單位。

α-GAL活性(nmol/min/104cell) =[(ΔA+0.0027) ÷0.00585×V反總]÷(500×V樣÷V樣總)÷T

=0.08×(ΔA +0.0027)

V反總:反應(yīng)體系總體積,0.07mL;V樣:加入反應(yīng)體系中樣本體積,0.01mL;V樣總:加入提取液體積,1mL;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;W:樣本質(zhì)量,g; 500:細(xì)胞或細(xì)菌總數(shù),500萬(wàn);T:反應(yīng)時(shí)間,30min。

 

b.用96孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下

標(biāo)準(zhǔn)條件下測(cè)定的回歸方程為y = 0.0039x -0.0027;x為標(biāo)準(zhǔn)品濃度(nmol/mL),y為吸光值。

(1)按樣本蛋白濃度計(jì)算:

單位的定義:每mg組織蛋白每分鐘產(chǎn)生1nmol對(duì)-硝基苯定義為一個(gè)酶活性單位。

α-GAL活性(nmol/min/mg prot)=[(ΔA+0.0027) ÷0.0039×V反總]÷(V樣×Cpr)÷T

=59.83×(ΔA+0.0027) ÷Cpr

(2)按樣本鮮重計(jì)算:

單位的定義:每g組織每分鐘產(chǎn)生1nmol對(duì)-硝基苯定義為一個(gè)酶活性單位。

α-GAL活性(nmol/min/g鮮重)=[(ΔA+0.0027)÷0.0039×V反總]÷(W×V樣÷V樣總)÷T

=59.83×(ΔA+0.0027) ÷W

(3)按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算:

單位的定義:每1萬(wàn)個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘產(chǎn)生1nmol對(duì)-硝基苯定義為一個(gè)酶活性單位。

α-GAL活性(nmol/min/104cell) =[(ΔA+0.0027) ÷0.0039×V反總]÷(500×V樣÷V樣總)÷T

 =0.12×(ΔA +0.0027)

V反總:反應(yīng)體系總體積,0.07mL;V樣:加入反應(yīng)體系中樣本體積,0.01mL;V樣總:加入提取液體積,1mL;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;W:樣本質(zhì)量,g; 500:細(xì)胞或細(xì)菌總數(shù),500萬(wàn);T:反應(yīng)時(shí)間,30min。

1.jpg


公司正在出售的產(chǎn)品:

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Cullin2蛋白ELISA試劑盒

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