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NHS活化磁珠

  • 更新時間:  2023-09-28
  • 產(chǎn)品型號:  A-Hc2061
  • 簡單描述
  • NHS活化磁珠是均勻的,表面覆蓋有高密度NHS(N-羥基琥珀 酰亞胺) 官能團的磁珠。
詳細介紹

商品屬性:

產(chǎn)品名稱

規(guī)格

貨號

NHS活化磁珠

1ml30mg/ml

A-Hc2061

產(chǎn)品介紹:

NHS-Activated Magnetic Beads 是均勻的,表面覆蓋有高密度NHS(N-羥基琥珀 酰亞胺) 官能團的磁珠。磁珠通過形成穩(wěn)定的酰胺鍵方式,快速、高效的共價結(jié)合任何含有伯胺的配 體(圖 1)。本款磁珠可以在偶聯(lián)條件下快速完成反應(yīng)(室溫 pH 6.5-9 下 15-30 分 鐘,4℃ 下 4 小時),且不需要危險化學(xué)品。 NHS-activated Magnetic Beads 適于結(jié)合大分子蛋白。 Long-arm NHS-activated Magnetic Beads 被推薦用于結(jié)合小肽分子, 因為其長臂(21-原子) 的親水連接基團可以減少位阻現(xiàn)象。 NHS-activated Magnetic Beads 可以地作為親和樹脂進行親和純化,將分子、 細胞和 部分細胞提取物進行提煉純化。在與配體結(jié)合后,將磁珠添加到含有目標分子的樣品中,然 后混合、孵育、洗滌和洗脫目標分子(圖2)。

產(chǎn)品特點及優(yōu)勢:

·預(yù)活化即用型磁珠
·便于使用
·在pH7.4,4℃-25℃條件下可以快速偶聯(lián)
·穩(wěn)定的共價鍵,低水平的配體泄漏
·可重復(fù)使用的免疫親和基質(zhì)
·極低的非特異性結(jié)合率
·用途:用于純化抗體,蛋白質(zhì)/肽,DNA / RNA;細胞篩選、免疫沉淀
操作步驟

提示:
強烈建議在實驗過程中進行滴定優(yōu)化,以確定每個實驗中應(yīng)用的磁珠數(shù)量。該協(xié)議可以相應(yīng)地放大和縮小。避免使用含有 tris 或其他含有伯胺類試劑的緩沖液,因為它們與預(yù)期的偶聯(lián)反應(yīng)競爭。
1.將適量的珠子轉(zhuǎn)移到離心管中。將管放在磁力分離器上 1-3 分鐘。當磁珠沉淀時, 去除上清液。 

2.取下試管,加入 5 倍磁珠溶液體積的 PBS 緩沖液,通過震蕩重新懸浮磁珠,渦旋 30 秒。將試管至于室溫環(huán)境 1-3 分鐘,再將管放在磁力分離器上 1-3 分鐘。當磁珠沉淀 時,去除上清液。 

3.重復(fù)步驟 2 兩次。 

4.向含有目標蛋白質(zhì)的粗樣品中添加洗滌過的磁珠,并在室溫或所需溫度下溫浴 1-2 小時 (溫度越低,培養(yǎng)時間越長)。提示:強烈建議進行滴定實驗以優(yōu)化培養(yǎng)時間。因為孵化 的時間太長可能會導(dǎo)致很高的背景。 

5.用 5 倍磁珠體積的 PBS 緩沖液或 1M NaCl 清洗磁珠,直到 280nm 處洗脫液的吸 光度接近背景水平(OD 280<0.05)。提示:添加更高濃度的鹽、非離子洗滌劑和還原劑也 可能會降低非特異性背景。例如,向洗滌緩沖液中添加 NaCl(濃度為 1-1.5 M)、0.1-0.5% 的非離子洗滌劑,如 TritonX-100 或 Tween-20,以及還原劑,如 DTT 或 TCEP(我們通 常使用 3mM)。 6.通過適當?shù)姆椒?,如?pH(2-4)、高 pH(10-12)、高鹽、高溫、親和洗脫或 SDS-PAGE 上樣緩沖液中煮沸,洗脫目標蛋白。


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