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Caco-2人結(jié)腸腺癌細(xì)胞

  • 更新時(shí)間:  2025-09-11
  • 產(chǎn)品型號(hào):  
  • 簡(jiǎn)單描述
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詳細(xì)介紹

Caco-2人結(jié)腸腺癌細(xì)胞

名稱

Caco-2 (人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞) (STR鑒定正確)

別稱

CaCo-2; CACO-2; Caco 2; CACO 2; CACO2; CaCo2; CaCO2; Caco2; Caco-2/ATCC

種屬

生長(zhǎng)特性

貼壁細(xì)胞

細(xì)胞形態(tài)

上皮細(xì)胞樣

生長(zhǎng)培養(yǎng)基

MEM(含NEAA)+20% FBS+1% P/S

凍存條件

凍存液:55% 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO溫度:液氮

培養(yǎng)條件

氣相:空氣,95%;CO2,5%溫度:37℃

推薦傳代比例

1:3-1:4

推薦換液頻率

2~3次/周

注意事項(xiàng)

1. 細(xì)胞貼壁慢特別是剛復(fù)蘇時(shí),一般兩到三天貼壁展開,會(huì)有空泡; 2. 細(xì)胞在傳代細(xì)胞中注意消散,不然難貼壁; 3. 成片狀生長(zhǎng),細(xì)胞密度越大,表面空泡黑點(diǎn)越多; 4. 一般細(xì)胞長(zhǎng)至80%傳代,細(xì)胞成片,其實(shí)密度很大; 5. 細(xì)胞生長(zhǎng)太滿對(duì)細(xì)胞狀態(tài)影響嚴(yán)重,傳代后易碎,死亡; 6. 細(xì)胞生長(zhǎng)時(shí)間越久,消化難度也會(huì)隨之增加;消化到輕拍培養(yǎng)瓶側(cè)邊細(xì)胞可以滑落的時(shí)候可以終止。

背景描述

Caco-2細(xì)胞分離自直腸原位癌;當(dāng)長(zhǎng)到滿時(shí),Caco-2細(xì)胞表現(xiàn)出特征性的腸上皮細(xì)胞分化。Caco-2細(xì)胞表達(dá)維甲酸結(jié)合蛋白I和維甲酸結(jié)合蛋白Ⅱ,并呈角質(zhì)蛋白陽(yáng)性。

年齡(性別)

男;72歲

組織來源

結(jié)腸,結(jié)直腸腺癌

細(xì)胞類型

腫瘤細(xì)胞

腫瘤類型

腸癌細(xì)胞

生物安全等級(jí)

1

倍增時(shí)間

~60-80 hours

致瘤性

Yes, in nude mice; forms moderately well differentiated adenocarcinoma consistent with colonic primary (grade II).

受體表達(dá)情況

This cell line expressed heat stable enterotoxin (Sta, E. coli) and epidermal growth factor (EGF).

基因表達(dá)情況

keratin, retinoic acid binding protein 1, retinol binding protein 2

保藏機(jī)構(gòu)

ATCC; HTB-37 BCRJ; 0059 DSMZ; ACC-169 ECACC; 09042001 ECACC; 86010202

二、細(xì)胞培養(yǎng)操作

1) 復(fù)蘇細(xì)胞:以下細(xì)胞培養(yǎng)凍存處理僅供參考,具體操作步驟以隨貨產(chǎn)品說明書為主。將含有1 mL細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,加4 mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000 rpm條件下離心3 min,棄去上清液,加1-2 mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入含適量培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10 cm皿中,加入約8 mL培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2) 細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

    a、棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。        

    b、加1 mL消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,使消化液浸潤(rùn)所有細(xì)胞,將培養(yǎng)瓶置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2 min(視細(xì)胞情況而定),然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺(tái),輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加2-3ml培養(yǎng)基終止消化。輕輕打勻后裝入無菌離心管中,1000 rpm離心5 min,棄去上清液,補(bǔ)加1-2 mL培養(yǎng)液后吹勻。        

     c、將細(xì)胞懸液按1:2比例分到新的含8 mL培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。 3) 細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí),可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為例;a、收集細(xì)胞及細(xì)胞培養(yǎng)液,裝入無菌離心管中,1000 rpm條件下離心4 min,棄去上清液,用PBS清洗一遍,棄盡PBS,進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)。

     b、根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入無血清細(xì)胞凍存液,使細(xì)胞密度5×106~1×107/mL,輕輕混勻,每支凍存管凍存1mL細(xì)胞懸液,注意凍存管做好標(biāo)識(shí)。將凍存管放入-80℃冰箱,24 h后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。  

三、培養(yǎng)注意事項(xiàng)

1. 收到細(xì)胞后首先觀察細(xì)胞瓶是否完好,培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象,若有上述現(xiàn)象 發(fā)生請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系。

2. 仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書,了解細(xì)胞相關(guān)信息,如細(xì)胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需 細(xì)胞因子等,確保細(xì)胞培養(yǎng)條件一致,若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問題,責(zé)任由 客戶自行承擔(dān)。

3. 用 75%酒精擦拭細(xì)胞瓶表面,顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問題,部分細(xì)胞由于溫度 變化及劇烈碰亡破碎形成碎片,是正常現(xiàn)象。觀察好細(xì)胞狀態(tài)后,75%酒精消毒瓶壁將 T25 瓶置于 37℃培養(yǎng)箱放置 2-4h。

4. 貼壁細(xì)胞可以消化,懸浮細(xì)胞直接混勻收集細(xì)胞,900 rpm-1000 rpm 離心 3 min,棄上 清。加 5 mL PBS 重懸細(xì)胞,再 900 rpm-1000 rpm 離心 3 min,用新鮮的培養(yǎng)基重懸 細(xì)胞,并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中,置于培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。

5. 請(qǐng)客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細(xì)胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶收到細(xì)胞后前 3 天各拍幾張細(xì)胞照片,記錄細(xì)胞狀態(tài),便于和我司技術(shù)部溝通 交流。由于運(yùn)輸?shù)脑颍瑐€(gè)別敏感細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況,請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系,告知細(xì)胞 的具體情況,以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決。

7. 該細(xì)胞僅供科研使用。

8. 備注:運(yùn)輸用的培養(yǎng)基 (灌液培養(yǎng)基) 不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞,請(qǐng)換用按照說明書細(xì)胞培 養(yǎng)條件新配制的培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞。     收到細(xì)胞后第一次傳代建議 1:2 傳代。

9. 注意:  1:2 傳代就是 1 個(gè) T25 瓶傳 2 個(gè) T25 瓶或者 2 個(gè) 6cm 皿。不是 1 個(gè) T25 瓶傳 2 個(gè)10cm 皿。


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