掌握PCR鑒定試劑盒原理，操作流程更順暢
瀏覽次數(shù)：954發(fā)布日期：2020-03-11
原理
本試劑盒是根據(jù)歐盟標(biāo)準(zhǔn)和而進(jìn)行設(shè)計(jì)組裝而成。
本方法為熒光PCR檢測(cè)方法，反應(yīng)在同一管內(nèi)連續(xù)進(jìn)行，操作簡(jiǎn)單，并有效防止了污染，能對(duì)飼料中的豬源性成分進(jìn)行快速檢測(cè)，具有特異性高、敏感性強(qiáng)和操作簡(jiǎn)便的特點(diǎn)，探針報(bào)告基團(tuán)為FAM，淬滅基團(tuán)為None。
特點(diǎn)：
1.即開(kāi)即用，用戶(hù)只需要提供病毒RNA模板。
2.兩管式RT-PCR，一次RT反應(yīng)產(chǎn)物可以作為多次PCR的模板。本試劑盒提供10次的RT反應(yīng)試劑和50次的PCR試劑。
3.引物經(jīng)過(guò)優(yōu)化，特異性高，引物是根據(jù)基因的保守區(qū)域設(shè)計(jì)，適用于所有強(qiáng)、中、弱新城疫毒株，產(chǎn)物長(zhǎng)度為421 bp。
4.PCR mix中含上樣染料，PCR后可以直接上樣電泳。
操作流程：
1.整個(gè)檢測(cè)過(guò)程應(yīng)嚴(yán)格按照本說(shuō)明書(shū)要求分別在試劑準(zhǔn)備區(qū)、樣本處理區(qū)和PCR擴(kuò)增區(qū)進(jìn)行操作，各區(qū)實(shí)驗(yàn)服、儀器、耗材應(yīng)獨(dú)立使用，不能混用；實(shí)驗(yàn)用吸頭采用帶濾芯吸頭；樣本處理區(qū)應(yīng)配有生物安全柜，樣本處理在生物安全柜中進(jìn)行操作；三個(gè)區(qū)應(yīng)該配有紫外線殺菌裝置。
2.為避免RNA降解，樣本處理過(guò)程應(yīng)在0-4℃條件下操作，且完成實(shí)驗(yàn)后立即上機(jī)檢測(cè)；樣本處理過(guò)程中使用的器具耗材應(yīng)經(jīng)過(guò)無(wú)核酶處理。
3.每次實(shí)驗(yàn)應(yīng)該設(shè)置陰、陽(yáng)性對(duì)照。
4.試劑盒所有試劑在使用前應(yīng)該在常溫下充分融化混勻，并應(yīng)瞬時(shí)離心。
5.試劑盒內(nèi)所配陰性和陽(yáng)性對(duì)照在一次使用前應(yīng)全部轉(zhuǎn)移至標(biāo)本準(zhǔn)備區(qū)，并單獨(dú)存放。
6.為防止熒光干擾，應(yīng)避免裸手直接接觸PCR反應(yīng)管，并應(yīng)避免在PCR反應(yīng)管上進(jìn)行任何標(biāo)記。
7.儀器擴(kuò)增相關(guān)參數(shù)應(yīng)按照本說(shuō)明書(shū)相關(guān)要求進(jìn)行設(shè)置；不同批號(hào)試劑不能混用。
8. ABI系列熒光定量PCR儀參數(shù)設(shè)置中不選ROX校正，淬滅基因選擇None。
9.實(shí)驗(yàn)過(guò)程中產(chǎn)品的廢棄物應(yīng)該進(jìn)行無(wú)害化處理后方可丟棄。
PCR鑒定試劑盒使用注意事項(xiàng)：
1、基礎(chǔ)程序；
2、擴(kuò)增溫度和延伸溫度；
3、反應(yīng)時(shí)間；
4、循環(huán)次數(shù)；
5、PCR 反應(yīng)液的配制；
6、PCR技術(shù)的基本原理；
7、PCR的反應(yīng)動(dòng)力學(xué)；
8、PCR擴(kuò)增產(chǎn)物；
9、PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。
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