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在分子生物學(xué)研究中，有很多實(shí)驗(yàn)需要獲得目的基因的序列進(jìn)而確定基因的表達(dá)水平，這就需要得到樣品中高質(zhì)量、高純度的RNA，本文就RNA提取的原理、方法進(jìn)行總結(jié)，并提供了不同類型樣品RNA提取的推薦試劑盒。

RNA提取的基本原理

裂解過程：高濃度蛋白質(zhì)變性劑的裂解方法，是抽提RNA的第一方案。

總RNA的抽提，最重要的是快速裂解細(xì)胞膜，而在DNA提取過程中存在的基因組與蛋白質(zhì)“纏"住的問題，并不會(huì)對(duì)后續(xù)的純化過程產(chǎn)生大的影響，可以不考慮。

高濃度蛋白質(zhì)變性劑能快速破壞細(xì)胞膜，進(jìn)而迅速抑制住細(xì)胞內(nèi)的RNA酶，從而保證了RNA的完整性，絕大部分樣品的RNA抽提方法，都是以高濃度的蛋白質(zhì)變性劑為基礎(chǔ)的。

Trizol方法

常用的RNA提取方法是Trizol方法。Trizol內(nèi)含異硫氰酸胍能迅速破碎細(xì)胞，同時(shí)使核蛋白復(fù)合體中的蛋白變性并釋放出核酸，由于釋放出的DNA和RNA在特定pH值下的溶解度不同，且分別位于中間相和水相，從而使DNA和RNA得到分離，取出水相后，通過有機(jī)溶劑  () 抽提及異丙醇沉淀，可得到純凈RNA。

Trizol方法的提取過程：

1. 取離心管做好標(biāo)記，將一定量的待提取樣品應(yīng)用液氮研磨成粉末狀；

2. 加入1mL的Trizol，漩渦混勻，室溫靜置5min。
一定要將材料研磨充分，且一旦研磨完畢立刻加入Trizol混勻；

3. 加入200µL，上下顛倒15s，室溫靜置3min；

4. 12000 r/min 4℃離心15min；

5. 新取一離心管，小心吸取無色上清至該離心管；

樣品分三層 (無色上清水相，中間白色層，粉色下層有機(jī)相)，

6. 加入等體積異丙醇，輕輕混勻，冰浴10～20min，棄上清；

7. 用1mL 75%的乙醇懸浮沉淀，12000 r/min 4℃離心10min；

8. 棄上清，再短暫離心，沉淀于室溫下晾干；

9. 加入30-50µL DEPC處理的水溶解RNA。

注：使用一半異丙醇加一半高鹽溶液替代純粹的異丙醇，可以大大降低多糖殘留。