影響ELISA實(shí)驗(yàn)因素闡述
瀏覽次數(shù)：1786發(fā)布日期：2024-03-25
酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（Enzyme-Linked ImmunosorbentAssays,ELISA）以來(lái)，由于ELISA具有快速、敏感、簡(jiǎn)便、易于標(biāo)準(zhǔn)化等優(yōu)點(diǎn)，使其得到迅速的發(fā)展和廣泛應(yīng)用。盡管早期的ELISA由于特異性不夠高而妨礙了其在實(shí)際中應(yīng)用的步伐，但隨著方法的不斷改進(jìn)、材料的不斷更新，尤其是采用基因工程方法制備包被抗原，采用針對(duì)某一抗原表位的單克隆抗體進(jìn)行阻斷ELISA試驗(yàn)，都大大提高了ELISA的特異性，加之電腦化程度高的ELISA檢測(cè)儀的使用，使ELISA更為簡(jiǎn)便實(shí)用和標(biāo)準(zhǔn)化，從而使其成為廣泛應(yīng)用的檢測(cè)方法之一。
基本原理：
ELISA方法的基本原理是酶分子與抗體或抗抗體分子共價(jià)結(jié)合，此種結(jié)合不會(huì)改變抗體的免疫學(xué)特性，也不影響酶的生物學(xué)活性。此種酶標(biāo)記抗體可與吸附在固相載體上的抗原或抗體發(fā)生特異性結(jié)合。滴加底物溶液后，底物可在酶作用下使其所含的供氫體由無(wú)色的還原型變成有色的氧化型，出現(xiàn)顏色反應(yīng)。因此，可通過(guò)底物的顏色反應(yīng)來(lái)判定有無(wú)相應(yīng)的免疫反應(yīng)，顏色反應(yīng)的深淺與標(biāo)本中相應(yīng)抗體或抗原的量呈正比。此種顯色反應(yīng)可通過(guò)ELISA檢測(cè)儀進(jìn)行定量測(cè)定，這樣就將酶化學(xué)反應(yīng)的敏感性和抗原抗體反應(yīng)的特異性結(jié)合起來(lái)，使ELISA方法成為一種既特異又敏感的檢測(cè)方法。
一、試劑的影響因素：
應(yīng)選用有國(guó)家批準(zhǔn)文號(hào)，質(zhì)量靠得住的產(chǎn)品，不能圖便宜，忽視質(zhì)量保證。試劑應(yīng)妥善保存于4℃冰箱內(nèi)，在使用時(shí)先平衡至室溫，不同批號(hào)的試劑組分不宜交叉使用。試劑開(kāi)啟后要在一周內(nèi)用完，剩余的試劑下次用時(shí)應(yīng)先檢查是否變質(zhì)，，顯色劑如被污染變色將造成全部顯色，導(dǎo)致錯(cuò)誤結(jié)果。過(guò)期的試劑不宜再用，若別無(wú)選擇，應(yīng)做好雙份質(zhì)控品的監(jiān)測(cè)，確保結(jié)果的可靠性。
二、影響因素：
酶聯(lián)免疫(ELISA)是目前檢驗(yàn)科常用的免疫學(xué)檢測(cè)方法之一，其操作簡(jiǎn)單，無(wú)須特殊設(shè)備，使其在各級(jí)醫(yī)院都有應(yīng)用。但是，如果忽視了影響其結(jié)果的因素，難免會(huì)造成假陰性或假陽(yáng)性，因此，了解影響實(shí)驗(yàn)的因素，減少差錯(cuò)事故的發(fā)生是極其必要的。
三、實(shí)驗(yàn)室操作人員的素質(zhì)因素：
實(shí)驗(yàn)室人員的素質(zhì)主要包括五個(gè)方面：思想素質(zhì)、文化素質(zhì)、技術(shù)素質(zhì)、心理素質(zhì)、身體素質(zhì)。首先應(yīng)具備一個(gè)良好的思想素質(zhì)，因?yàn)槲覀兊姆?wù)對(duì)象是人，我們的道德水平直接關(guān)系到人們的健康和生命安危，如果馬馬虎虎。三心二意，難免會(huì)有差錯(cuò)事故發(fā)生，我們應(yīng)該熱愛(ài)專業(yè)，耐心細(xì)致。在工作中如標(biāo)本混淆、張冠李戴、報(bào)告單發(fā)錯(cuò)等都有可能造成嚴(yán)重后果；其次文化素質(zhì)和技術(shù)素質(zhì)，我們要熟練掌握本專業(yè)的基本理論和基本技術(shù)，認(rèn)真學(xué)習(xí)新理論新知識(shí)，努力提高自己的業(yè)務(wù)水平，創(chuàng)造一個(gè)能夠勝任本職工作的技術(shù)平臺(tái)。良好的心理素質(zhì)就是要勇于面對(duì)工作生活中的挫折，在繁忙工作中，有條不紊，冷靜沉著的處理有關(guān)事務(wù)。人員素質(zhì)問(wèn)題是影響檢驗(yàn)結(jié)果的首要因素。
四、標(biāo)本處理因素：
實(shí)驗(yàn)室人員收到標(biāo)本后應(yīng)認(rèn)真查對(duì)，對(duì)不符合要求的標(biāo)本和申請(qǐng)單要拘收，合格標(biāo)本要及時(shí)分離血清，避免溶血，提取血清時(shí)不應(yīng)混有大量纖維蛋白或細(xì)胞成分。對(duì)不能及時(shí)檢測(cè)的標(biāo)本要妥善保存于4℃冰箱，做好原始記錄，標(biāo)本管上最好標(biāo)上待檢者姓名、日期。從冰箱取出的標(biāo)本要預(yù)溫至室溫，對(duì)冰凍的樣品要融化好，并充分混勻再用。
五、操作過(guò)程的影響因素：
1、操作前應(yīng)對(duì)實(shí)驗(yàn)的物理參數(shù)有充分的了解，如環(huán)境溫度(保持在18 C～25℃)、反應(yīng)孵育溫度和孵育時(shí)間、洗滌的次數(shù)等，要先查看水育箱溫度，是否符合要求。
2、正確使用加樣器加樣器應(yīng)垂直加入標(biāo)本或試劑，避免刮擦包被板底部。加樣過(guò)程中避免液體外濺，血清殘留在反應(yīng)孔壁上，加樣器吸頭要清洗干凈，避免污染，加樣次序要與說(shuō)明書一致，否則可導(dǎo)致結(jié)果錯(cuò)誤，實(shí)驗(yàn)重復(fù)性差。
3、手工洗板加洗液時(shí)沖擊力不要太大，洗滌次數(shù)不要超過(guò)說(shuō)明書推薦的洗滌次數(shù)，洗液在反應(yīng)孔內(nèi)滯留的時(shí)間不宜太長(zhǎng)。不要使洗液在孔間竄流，造成孔問(wèn)污染，導(dǎo)致假陰性或假陽(yáng)性。
4、要保證加液量一致 我們?cè)谑褂脮r(shí)感覺(jué)滴瓶加液不如加樣器好，滴瓶不易控制加液量不準(zhǔn)，造成顯色不統(tǒng)一，判斷錯(cuò)誤。
5、顯色液量不可過(guò)多 加樣的工作環(huán)境不能處于陽(yáng)光直射的環(huán)境下，加顯色系統(tǒng)后要避光反應(yīng)，顯色液量不能過(guò)多，以免顯色過(guò)強(qiáng)。
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