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測定意義

植物葉綠素廣泛存在于綠色植物組織中，其含量與光合作用、營養(yǎng)狀況密切相關(guān)，是反應(yīng)植物生長狀況的重要指標。

測定原理

葉綠素a和葉綠素b在645nm和663nm處有最大吸收，根據(jù)經(jīng)驗公式可計算得葉綠素a和葉綠素b以及總?cè)~綠素含量。

自備實驗用品及儀器

天平、研缽、可見分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96孔板、10mL玻璃試管、錫箔紙、丙酮。

試劑組成和配制    

試劑一：粉劑×1瓶，4℃保存。          

測定操作

1. 稱取約新鮮植物葉片或其它綠色組織，去掉中脈，稱取約0.1g，剪碎，用蒸餾水洗干凈。

2. 提取液的準備：取240mL蒸餾水和960mL丙酮，充分混勻待用。

3. 加入1mL蒸餾水，少量試劑一（約50mg），在黑暗或弱光條件下充分研磨，轉(zhuǎn)入10mL玻璃試管。

4. 用提取液沖洗研缽，將所有沖洗液轉(zhuǎn)入玻璃試管，用提取液補充至10mL，玻璃試管置于黑暗條件下或者包上錫箔紙浸提3h，觀察試管底部組織殘渣變白則提取

5. 取浸提液200μL于微量石英比色皿/96孔板，提取液調(diào)零，測定663nm和645nm處吸光值，分別記為A663和A645 。

計算公式

葉綠素a含量（mg/g 鮮重）=（12.7× A663 – 2.69 × A645）×V提×D÷m÷1000

                    = 0.01×（12.7× A663 – 2.69 × A645）×D÷m

葉綠素b含量（mg/g 鮮重）=（22.9× A645 – 4.68 × A663）×V提×D÷m÷1000

                    = 0.01×（22.9× A645 – 4.68 × A663）×D÷m

葉綠素總含量（mg/g 鮮重）=（20.21× A645 +8.02 × A663）×V提×D÷m÷1000

                    = 0.01×（20.21× A645 +8.02 × A663）×D÷m

V提：提取液體積，10mL；D：稀釋倍數(shù)；m：樣本質(zhì)量，g

注意事項

1. 葉綠素對光敏感，研磨和提取等操作盡量避光或者在弱光下進行。

2. 一定要浸提至組織殘渣變白，否則提取不充分。

3. 用提取液沖洗研缽一定要沖洗至所有的綠色物質(zhì)被轉(zhuǎn)移至玻璃試管。

4. 測定時吸光值超過1，可進行適當稀釋。

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