乙醛脫氫酶（ALDH）測試盒（比色法）
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貨號 | 產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 |
AS632114 | 乙醛脫氫酶（ALDH）測試盒（比色法） | 100管/96樣 |
AS632114 | 乙醛脫氫酶（ALDH）測試盒（比色法） | 50管/48樣 |
注意：正式測定之前選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測定。
測定意義
乙醛脫氫酶 (EC 1.2.1.10)是醛脫氫酶的一種，廣泛存在于各種動物、植物和微生物體內(nèi)。主要作用是將乙醛氧化成乙酸，在酒精代謝中起主要作用。在人類和許多動物體內(nèi)，線粒體乙醛脫氫酶能把對生物體有害的醇類轉(zhuǎn)化，所以在細(xì)胞解毒研究中乙醛脫氫酶受到高度關(guān)注；同時，乙醛脫氫酶在分子生物學(xué)以及相關(guān)疾病的檢測方面有較廣泛的研究應(yīng)用。
測定原理
在輔酶Ⅰ存在的條件下，乙醛脫氫酶催化乙醛和NAD+轉(zhuǎn)化為乙酸和NADH，在340nm處的吸光值會增加，測定340nm處的吸光值變化，可計(jì)算得到乙醛脫氫酶的活性。
自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器
天平、離心機(jī)、紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板、蒸餾水。
試劑組成和配制
提取液：液體100mL×1瓶，4℃保存。
試劑一：液體6mL×1瓶，4℃保存。
試劑二：液體2mL×1瓶，4℃避光保存。
試劑三：液體1mL×1支，4℃避光保存。
試劑四：液體1mL×1支，4℃保存。
試劑五：液體1mL×1支，4℃保存。
ALDH提取
組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL提取液）進(jìn)行冰浴勻漿，然后10000g，4℃，離心20min。
細(xì)胞：按照細(xì)胞數(shù)量（104個）：提取液體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細(xì)胞加入1mL提取液），冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時間3min）；然后10000g，4℃，離心10min，取上清置于冰上待測。
液體：直接檢測。
測定操作表
分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱30min，調(diào)節(jié)波長至340nm。
操作表
對照管 | 測定管 | |
樣本（µL） | 40 | |
試劑一（µL） | 60 | 60 |
試劑二（µL） | 20 | 20 |
試劑三（µL） | 10 | 10 |
試劑四（µL） | 10 | 10 |
試劑五（µL） | 10 | 10 |
H2O（µL） | 90 | 50 |
充分混勻，37℃，微量石英比色皿/96孔板，對照管調(diào)零，于340nm處測定0s與60s的吸光值A(chǔ)1和A2，△A= A2-A1。 | ||
ALDH酶活計(jì)算
用微量石英比色皿測定的計(jì)算公式如下
（1）按蛋白濃度計(jì)算
酶活定義：每毫克蛋白每分鐘催化還原1nmol NAD+的酶量為1個酶活單位。
ALDH酶活（nmol/min/mg prot）= 
×V反總÷（V樣×Cpr）÷T = 804×△A÷Cpr
（2）按樣本質(zhì)量計(jì)算
酶活定義：每克樣品每分鐘催化還原1nmol NAD+的酶量為1個酶活單位。
ALDH酶活（nmol/min/g 鮮重）= ×V反總÷（V樣×W÷V樣總）÷T= 804×△A÷W
（3）按照細(xì)胞數(shù)量計(jì)算
酶活定義：每104個細(xì)胞每分鐘催化還原1nmol NAD+的酶量為1個酶活單位。
ALDH酶活（nmol/min/104cell）= ×V反總÷（V樣÷V樣總×細(xì)胞數(shù)量（萬個））÷T= 804×△A÷細(xì)胞數(shù)量（萬個）
（4）按液體體積計(jì)算
酶活定義：每mL樣本每分鐘催化還原1nmol NAD+的酶量為1個酶活單位。
ALDH酶活（nmol/min/mL）= ×V反總÷V樣÷T= 804×△A
：NADH微摩爾消光系數(shù)，6.22×10-3 L/µmol/cm；d：比色皿光徑，1cm；V反總：反應(yīng)體系總體積，0.2mL；V樣：反應(yīng)體系中樣本體積，0.04mL；V樣總：加入提取液體積，1mL；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g
b．用96孔板測定的計(jì)算公式如下
（1）按蛋白濃度計(jì)算
酶活定義：每毫克蛋白每分鐘催化還原1nmol NAD+的酶量為1個酶活單位。
ALDH酶活（nmol/min/mg prot）= ×V反總÷（V樣×Crp）÷T = 1608×△A÷Cpr
（2）按樣本質(zhì)量計(jì)算
酶活定義：每克樣品每分鐘催化還原1nmol NAD+的酶量為1個酶活單位。
ALDH酶活（nmol/min/g 鮮重）= ×V反總÷（V樣×W÷V樣總）÷T = 1608×△A÷W
（3）按照細(xì)胞數(shù)量計(jì)算
酶活定義：每104個細(xì)胞每分鐘催化還原1nmol NAD+的酶量為1個酶活單位。
ALDH酶活（nmol/min/104cell）= ×V反總÷（V樣÷V樣總×細(xì)胞數(shù)量（萬個））÷T= 1608×△A÷細(xì)胞數(shù)量
（4）按液體體積計(jì)算
酶活定義：每mL樣本每分鐘催化還原1nmol NAD+的酶量為1個酶活單位。
ALDH酶活（nmol/min/mL）= ×V反總÷V樣÷T= 1608×△A
：NADH微摩爾消光系數(shù)，6.22×10-3 L/µmol/cm；d：96孔板光徑，0.5cm；V反總：反應(yīng)體系總體積，0.2mL；V樣：反應(yīng)體系中樣本體積，0.04mL；V樣總：加入提取液體積，1mL；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g
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