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蛋白質(zhì)羰基測試盒（比色法）

更新時間： 2023-10-13
產(chǎn)品型號： AS632160
簡單描述
蛋白質(zhì)羰基測試盒（比色法）是多種氨基酸在蛋白質(zhì)的氧化修飾過程中的早期標志，其含量高低表明蛋白質(zhì)氧化損傷程度的大小，是衡量蛋白質(zhì)氧化損傷的主要指標。

詳細介紹

本網(wǎng)站銷售的所有產(chǎn)品均不得用于人類或動物之臨床診斷或治療，僅可用于工業(yè)或科研等非醫(yī)療目的。

貨號	產(chǎn)品名稱	規(guī)格
AS632160	蛋白質(zhì)羰基測試盒（比色法）	100管/48樣
AS632160	蛋白質(zhì)羰基測試盒（比色法）	50管/24樣

注意：正式實驗之前選擇2-3個預期差異大的樣本做預測定。

測定意義：

蛋白質(zhì)羰基是多種氨基酸在蛋白質(zhì)的氧化修飾過程中的早期標志，其含量高低表明蛋白質(zhì)氧化損傷程度的大小，是衡量蛋白質(zhì)氧化損傷的主要指標。

測定原理：

羰基與2,4-二硝基肼反應生成紅色2,4-二硝基腙，在370nm處有特征吸收峰。

自備實驗用品及儀器：

天平、恒溫水浴鍋、低溫離心機、漩渦震蕩儀、可見分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96孔板、蒸餾水、無水乙醇、乙酸乙酯。

試劑組成和配制：

提取液：液體100mL×1瓶，4℃保存。

試劑一：粉劑0.1g×5支，4℃避光保存。（使用前根據(jù)樣品數(shù)，每支加1mL水溶解，每支為10個樣品用量）

試劑二：液體6mL×1瓶，4℃避光保存。

試劑三：液體6mL×1瓶，4℃保存。

試劑四：液體15mL×1瓶，4℃保存。

試劑五：根據(jù)測定樣品量，將乙酸乙酯和無水乙醇等體積混合。

試劑六：液體60mL×1瓶，4℃保存。

樣品處理：

組織樣品：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL提取液）進行冰浴勻漿，于4℃，4000g離心10min，取上清，加入0.1mL試劑一，室溫放置10min，4℃，10000g離心10min，取上清待測。

細菌、真菌：按照細胞數(shù)量（104個）：提取液體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細胞加入1mL提取液），冰浴超聲波破碎細胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時間3min）；然后10000g，4℃，離心10min，取上清置于冰上待測。

血清等液體樣本：直接測定。

測定步驟和操作表：

分光光度計/酶標儀預熱30min，調(diào)節(jié)波長至370nm。
操作表

	對照管	測定管
樣品（μL）	60	60
試劑二（μL）		120
試劑三（μL）	120
混勻，37℃避光反應1h
試劑四（μL）	150	150
靜置5min，4℃，12000g離心15min，棄上清，留沉淀
試劑五（μL）	300	300
漩渦混勻，4℃，12000g離心10min，棄上清，留沉淀
試劑五（μL）	300	300
漩渦混勻，4℃，12000g離心10min，棄上清，留沉淀
試劑五（μL）	300	300
漩渦混勻，4℃，12000g離心10min，棄上清，留沉淀
試劑六（μL）	300	300
漩渦混勻，37℃溫育15min，沉淀全部溶解后，4℃，12000g離心15min，取上清200μL于微量石英比色皿/96孔板中，測定A370。ΔA=A測定管-A對照管

計算公式：

a．用微量石英比色皿測定的計算公式如下

按照樣本蛋白濃度計算

蛋白質(zhì)羰基含量（μmol/mg prot）= [ΔA370×V反總÷（ε×d）]÷(V樣×Cpr) =0.227×ΔA370÷Cpr

按照樣本重量計算

蛋白質(zhì)羰基含量（μmol/g 鮮重）= [ΔA370×V反總÷（ε×d）]÷(W ×V樣÷V樣總) =0.227×ΔA370÷W

3. 按照細胞數(shù)量計算

蛋白質(zhì)羰基含量（μmol/104cell）= [ΔA370×V反總÷（ε×d）]÷(細胞數(shù)量 ×V樣÷V樣總) =0.227×ΔA370÷細胞數(shù)量

按照液體體積計算

蛋白質(zhì)羰基含量（μmol/mL）= [ΔA370×V反總÷（ε×d）]÷V樣=0.227×ΔA370

V反總：反應體系總體積，0.3 mL；ε：羰基毫摩爾消光系數(shù)，22 L/mmol/cm；d：比色皿光徑，1cm；V樣：加入樣本體積，0.06 mL；V樣總：加入提取液體積，1 mL；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL，W：樣本質(zhì)量，g

用96孔板測定的計算公式如下

1. 按照樣本蛋白濃度計算

蛋白質(zhì)羰基含量（μmol/mg prot）= [ΔA370×V反總÷（ε×d）]÷(V樣×Cpr) =0.454×ΔA370÷Cpr

2. 按照樣本重量計算

蛋白質(zhì)羰基含量（μmol/g 鮮重）= [ΔA370×V反總÷（ε×d）]÷(W ×V樣÷V樣總) =0.454×ΔA370÷W

3. 按照細胞數(shù)量計算

蛋白質(zhì)羰基含量（μmol/104cell）= [ΔA370×V反總÷（ε×d）]÷(細胞數(shù)量 ×V樣÷V樣總) =0.454×ΔA370÷細胞數(shù)量

4. 按照液體體積計算

蛋白質(zhì)羰基含量（μmol/mL）= [ΔA370×V反總÷（ε×d）]÷V樣=0.454×ΔA370

V反總：反應體系總體積，0.3 mL；ε：羰基毫摩爾消光系數(shù)，22 L/mmol/cm；d：96孔板光徑，0.5cm；V樣：加入樣本體積，0.06 mL；V樣總：加入提取液體積，1 mL；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL，W：樣本質(zhì)量，g

注意事項：

1. 試劑一使用前根據(jù)要測定的樣品數(shù)現(xiàn)配，配置好后4℃保存，若變?yōu)楹谏?，則不能使用。

2. 試劑二見光易分解，反應需嚴格避光。

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上一個： AS632161二胺氧化酶(DAO)測試盒（比色法）
下一個： AS632156多酚氧化酶(PPO）測試盒（比色法）

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