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超氧陰離子清除能力測(cè)試盒(比色法)

  • 更新時(shí)間:  2023-10-13
  • 產(chǎn)品型號(hào):  AS632179
  • 簡(jiǎn)單描述
  • 超氧陰離子清除能力測(cè)試盒(比色法)作為生物體代謝過(guò)程中產(chǎn)生的一種自由基,可攻擊生物大分子,如脂質(zhì)、蛋白質(zhì)、核酸和聚不飽和脂肪酸等,使其交鏈或者斷裂,引起細(xì)胞結(jié)構(gòu)和功能的破壞,與機(jī)體衰老和病變有很密切的關(guān)系,清除超氧陰離子自由基的研究已經(jīng)得到了廣泛的關(guān)注。
詳細(xì)介紹

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貨號(hào)

產(chǎn)品名稱(chēng)

規(guī)格

AS632179

超氧陰離子清除能力測(cè)試盒(比色法)

100管/96樣

AS632179

超氧陰離子清除能力測(cè)試盒(比色法)

50管/48樣

注意:正式測(cè)定之前選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定。

測(cè)定意義

超氧陰離子自由基作為生物體代謝過(guò)程中產(chǎn)生的一種自由基,可攻擊生物大分子,如脂質(zhì)、蛋白質(zhì)、核酸和聚不飽和脂肪酸等,使其交鏈或者斷裂,引起細(xì)胞結(jié)構(gòu)和功能的破壞,與機(jī)體衰老和病變有很密切的關(guān)系,清除超氧陰離子自由基的研究已經(jīng)得到了廣泛的關(guān)注。

測(cè)定原理

AP-TEMED系統(tǒng)產(chǎn)生超氧陰離子,與鹽酸羥胺反應(yīng)生成NO2-,NO2-與對(duì)氨基苯磺酸和α-萘胺的作用生成紅色的偶氮化合物,在530nm處有特征吸收峰,樣品對(duì)超氧陰離子的清除能力與530nm的吸光值呈負(fù)相關(guān)。

自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器

天平、研缽、低溫離心機(jī)、可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板、恒溫水浴鍋。

試劑組成和配制

提取液:液體100mL×1瓶,4℃保存。

試劑一:液體1.5mL×1支,4℃避光保存。

試劑二:粉劑×1瓶,4℃避光保存。臨用前加6mL蒸餾水充分溶解。

試劑三:液體7.5mL×1瓶,4℃保存。

試劑四:液體7.5mL×1瓶,4℃避光保存。

試劑五:液體7.5mL×1瓶,4℃避光保存。

樣品處理

組織:按照質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱(chēng)取約0.1g,加入1mL提取液)加入提取液,冰浴勻漿后于4℃,10000g離心10min,取上清置于冰上待測(cè)。

細(xì)胞:按照細(xì)胞數(shù)量(104個(gè)):提取液體積(mL)為500~1000:1的比例(建議500萬(wàn)細(xì)胞加入1mL提取液),冰浴超聲波破碎細(xì)胞(功率300w,超聲3秒,間隔7秒,總時(shí)間3min);然后4℃,10000g離心10min,取上清置于冰上待測(cè)。

培養(yǎng)液或其它液體:直接檢測(cè)。

粉劑藥物可配制成相同濃度,比如1mg/mL。

測(cè)定操作


對(duì)照管

測(cè)定管

試劑一(μL)

10

10

試劑二(μL)

40

40

H2O(μL)

25


充分混勻,25℃反應(yīng)1min

樣品(μL)


25

試劑三(μL)

50

50

充分混勻,37℃反應(yīng)30min

試劑四(μL)

50

50

試劑五(μL)

50

50

充分混勻,37℃顯色20min,于微量石英比色皿/96孔板,在530nm處測(cè)定對(duì)照管和測(cè)定管的吸光值,分別記為A對(duì)照管和A測(cè)定管。

注意:對(duì)照管只需測(cè)定一次。

 

計(jì)算公式

超氧陰離子清除率 I%=

注意事項(xiàng)

  1. 試劑一4℃可保存2個(gè)月,配制好的試劑二4℃可保存一周,建議實(shí)驗(yàn)前配制,并盡快使用。

  2. 樣品處理完后立即進(jìn)行測(cè)定,或者低溫保存不超過(guò)24小時(shí)。

1.jpg


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