DLD-1人結直腸腺癌細胞
DLD-1人結直腸腺癌細胞
名稱 | DLD-1 (人結直腸腺癌上皮細胞) (STR鑒定正確) |
別稱 | DLD 1; DLD1; CoCL3 |
種屬 | 人 |
生長特性 | 貼壁細胞 |
細胞形態(tài) | 上皮細胞樣 |
生長培養(yǎng)基 | RPMI-1640＋10% FBS＋1% P/S |
凍存條件 | 凍存液：55% 基礎培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO溫度：液氮 |
培養(yǎng)條件 | 氣相：空氣，95%；CO2，5%溫度：37℃ |
推薦傳代比例 | 1:3-1:4 |
推薦換液頻率 | 2~3次/周 |
背景描述 | DLD-1細胞是由D·L·Dexter和其同事于1977-1979年分離的兩株結直腸腺癌細胞株中的一株。在ATCC和其它地方進行的DNA指紋鑒定和染色體組型分析表明DLD-1細胞與HCT-15細胞相似，說明這兩者是來自同一個人的不同克隆。DLD-1細胞和HCT-15細胞的遺傳起源可通過DNA指紋鑒定證實，但染色體組型分析顯示它們缺乏染色體標記一致改變或數目上一致改變。DLD-1細胞的CSAp陰性(CSAp-)，p53抗原表達呈陽性(p53抗原產生了一個C→T點突變導致241位的Ser→Phe)。DLD-1細胞角蛋白免疫過氧化物酶染色陽性，癌基因c-myc、K-ras、H-ras、N-ras、myb、sis和fos的表達呈陽性，癌基因N-myc的表達未做檢測。DLD-1細胞表達腫瘤特異性核基質蛋白CC-2、CC-3、CC-4、CC-5和CC-6。1979年提交到ATCC的DLD-1細胞代數不明且污染了支原體，其后經過12周多種抗生素聯(lián)合培養(yǎng)處理，處理之后每周用Hoechst染色和標準培養(yǎng)法檢測。其后連續(xù)11個月不加抗生素培養(yǎng)，DLD-1細胞所有的檢測呈陰性。 |
年齡（性別） | 成年 |
組織來源 | 結直腸腺癌上皮細胞 |
細胞類型 | 腫瘤細胞 |
腫瘤類型 | 腸癌細胞 |
生物安全等級 | 1 |
倍增時間 | ~24-48 hours |
致瘤性 | Yes, in nude mice (Tumors developed within 21 days at 100% frequency (5/5) in nude mice inoculated subcutaneously with 1×10^7 cells). |
抗原表達情況 | Blood Type O.The cells are weakly positive for keratins and vimentin.The cells are positive for keratin by immunoperoxidase staining.DLD-1 cells are positive for p53 antigen expression (the p53 antigen produced has a C -> T mut |
基因表達情況 | carcinoembryonic antigen (CEA) 0.5 ng/10^6 cells/10 days; colon antigen 3. |
保藏機構 | ATCC; CCL-221 BCRC; 60132 DSMZ; ACC-278 ECACC; 90102540 |
二、細胞培養(yǎng)操作
1) 復蘇細胞：以下細胞培養(yǎng)凍存處理僅供參考，具體操作步驟以隨貨產品說明書為主。將含有1 mL細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加4 mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000 rpm條件下離心3 min，棄去上清液，加1-2 mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入含適量培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或將細胞懸液加入10 cm皿中，加入約8 mL培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。
2) 細胞傳代：如果細胞密度達 80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
a、棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，使消化液浸潤所有細胞，將培養(yǎng)瓶置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2 min（視細胞情況而定），然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加2-3ml培養(yǎng)基終止消化。輕輕打勻后裝入無菌離心管中，1000 rpm離心5 min，棄去上清液，補加1-2 mL培養(yǎng)液后吹勻。
c、將細胞懸液按1:2比例分到新的含8 mL培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。 3) 細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為例；a、收集細胞及細胞培養(yǎng)液，裝入無菌離心管中，1000 rpm條件下離心4 min，棄去上清液，用PBS清洗一遍，棄盡PBS，進行細胞計數。
b、根據細胞數量加入無血清細胞凍存液，使細胞密度5×106~1×107/mL，輕輕混勻，每支凍存管凍存1mL細胞懸液，注意凍存管做好標識。將凍存管放入-80℃冰箱，24 h后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
三、培養(yǎng)注意事項
1. 收到細胞后首先觀察細胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象 發(fā)生請及時和我們聯(lián)系。
2. 仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關信息，如細胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需 細胞因子等，確保細胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導致細胞出現(xiàn)問題，責任由 客戶自行承擔。
3. 用 75%酒精擦拭細胞瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)。因運輸問題，部分細胞由于溫度 變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正?，F(xiàn)象。觀察好細胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將 T25 瓶置于 37℃培養(yǎng)箱放置 2-4h。
4. 貼壁細胞可以消化，懸浮細胞直接混勻收集細胞，900 rpm-1000 rpm 離心 3 min，棄上 清。加 5 mL PBS 重懸細胞，再 900 rpm-1000 rpm 離心 3 min，用新鮮的培養(yǎng)基重懸 細胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)。
5. 請客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細胞培養(yǎng)。
6. 建議客戶收到細胞后前 3 天各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態(tài)，便于和我司技術部溝通 交流。由于運輸的原因，個別敏感細胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時和我們聯(lián)系，告知細胞 的具體情況，以便我們的技術人員跟蹤回訪直至問題解決。
7. 該細胞僅供科研使用。
8. 備注：運輸用的培養(yǎng)基 (灌液培養(yǎng)基) 不能再用來培養(yǎng)細胞，請換用按照說明書細胞培 養(yǎng)條件新配制的培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。 收到細胞后第一次傳代建議 1：2 傳代。
9. 注意： 1:2 傳代就是 1 個 T25 瓶傳 2 個 T25 瓶或者 2 個 6cm 皿。不是 1 個 T25 瓶傳 2 個10cm 皿。
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