
粗球孢子菌PCR檢測試劑盒說明書
反應五要素:
參加PCR反應的物質主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應的關鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設計互補的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。設計引物應遵循以下原則:
①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴增長至10kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴增效果不佳,G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC隨機分布,避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結構,避免兩條引物間互補,特別是3'端的互補,否則會形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴增條帶。
⑤引物3'端的堿基,特別是末及倒數(shù)第二個堿基,應嚴格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點, 被擴增的靶序列有適宜的酶切位點, 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以低引物量產(chǎn)生所需要的結果為好,引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴增,且可增加引物之間形成二聚體的機會。
| 產(chǎn)品名稱 | 粗球孢子菌PCR檢測試劑盒說明書 | 
| 英文名稱 | Coccidioides immitisPCR | 
| 分類 | PCR檢測試劑盒 | 
特點:
高特異性:與其他病毒無交叉反應,無非特異性擴增;
高靈敏度:檢測靈敏度可達10~100;
操作簡便:該系列所有試劑均采用相同的體系和條件,可同時進行多個檢測;
高通量:多種雙重PCR檢測以及三重PCR檢測試劑盒。
樣品 DNA 的制備:
1.用自選方法純化樣品的 DNA,本試劑盒跟市場上大多數(shù)病毒 DNA 提取試劑盒兼 容。。也可以選購本公司的一管式病毒 DNAout 或其升級版柱式病毒 DNAout。 本試劑盒免費贈送 15 次 DNA 病毒裂解液試用裝(一管式病毒 DNAout 的成分)。
稀釋陽性對照(以 10E2-10E7 這 6 個 10 倍稀釋度為例。由于標準品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴散傳染性病原,本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對照,只提供可以直接使用的長為 86bp 的 DNA 片段作為陽性對照。
2.標記 6 個離心管,分別為 7,6,5,4,3,2。
3.用帶芯槍頭分別加入 45 μL 模板稀釋液(用帶芯槍頭,下同)。
4.在 7 號管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽性對照,充分震蕩 1 分鐘,得1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。5.換槍頭,在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
6.換槍頭,在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照到 5 號管中,充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
7.換槍頭,在 4 號管中加 5 μL 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對照到 4 號管中,得1×10E4 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。8.重復上面的操作直到得到 6 個稀釋度的陽性對照。放冰上待用。 ?
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使用及效果:
PCR反應特點
(1) 特異性強
PCR反應的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結合;
②堿基配對原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應的忠實性;
④靶基因的特異性與保守性。
其中引物與模板的正確結合是關鍵。引物與模板的結合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對原則的。聚合酶合成反應的忠實性及Taq DNA聚合酶耐高溫性,使反應中模板與引物的結合(復性)可以在較高的溫度下進行,結合的特異性大大增加,被擴增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū),其特異性程度就更高。
(2) 靈敏度高
PCR產(chǎn)物的生成量是以指數(shù)方式增加的,能將皮克(pg=10-12g)量級的起始待測模板擴增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬個細胞中檢出一個靶細胞;在病毒的檢測中,PCR的靈敏度可達3個RFU(空斑形成單位);在細菌學中zui小檢出率為3個細菌。
(3) 簡便、快速
PCR反應用耐高溫的Taq DNA聚合酶,一次性地將反應液加好后,即在DNA擴增液和水浴鍋上進行變性-退火-延伸反應,一般在2~4 小時完成擴增反應。擴增產(chǎn)物一般用電泳分析,不一定要用同位素,無放射性污染、易推廣。
(4) 對標本的純度要求低
不需要分離病毒或細菌及培養(yǎng)細胞,DNA 粗制品及總RNA均可作為擴增模板??芍苯佑门R床標本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細胞、活PCR技術概論。
腸道病毒通用型(EV-U)核酸檢測試劑盒(RT-PCR法) 20mgSaikosaponin BUV≥98% 0.312-20 ng/mL柴胡皂苷B;柴胡皂甙B
IL32抗體,兔單抗 23696-28-8 100mg 0.982ELISA 喹乙
ELISAKitforHumanC-Cchemokinereceptortype5528-63-210mg galgravin 0.312-20 ng/mL蓋爾格拉文
ELISAKitforHumanADP/ATPtranslocase31g 0.156-10 ng/mL膽固 CHOLESTEROL(SG)
硝酸鹽肉湯100g 250gEDTA Na2 乙二胺四乙酸二鈉
ELISAKitforHumanMyelin-oligodendrocyteglycoprotein500G 0.312-20 ng/mL4'-溴乙酰苯胺 4'-Bromoacetanilide >98.0%(GC)
5%糖發(fā)酵管130-02491 20支2-丁
小鼠腺成纖維細胞 20mg HPLC≥98%Orcinol glucosid用于含量測定5 x 10^5 cells/T25培養(yǎng)瓶苔葡萄糖苷;地衣二葡萄糖苷
TNFR2/CD120b/TNFRSF1B抗體,兔單抗1GELISA 溴百里藍 Bromothymol Blue
ELISAKitforHumanArachidonate12-lipoxygenase,12S-type6681-18-1 20mgMagnoflorine chloride HPLC≥98% 0.78-50 ng/mL氯化木蘭花堿; 木蘭花堿氯化物
NBL1/DAND1/DAN抗體,兔多抗10mgELISA 腺苷-5'-單磷酸鈉鹽 ADENOSINE-5'-MONOPHOSPHATE SODIUM SALT(SH)
APOA4/ApolipoproteinA-IV抗體,兔多抗,抗原親和純化122-32-7C57H104O6Triolein≥98%ELISA 甘油三油酸酯
ELISAKitforHumanUncharacterizedproteinKIAA1377100mg 7.8-500 ng/mL(+/-)-兒茶素水合物 CATECHIN, DL-(RG)
李氏菌增菌肉湯(LB1,LB2)基礎顆粒1g 5g 225ml/袋*10菲洛
Andrade氏糖類肉湯/安德雷德氏糖類肉湯/Andrade,sCarbohydrateBrothRZ3.0細菌的糖發(fā)酵試驗辣根過物酶
ELISAKitforHumanVisinin-likeprotein110mg 31.2-2000 pg/mL木香烴內(nèi)酯 COSTUNOLIDE(AS)
粗球孢子菌PCR檢測試劑盒說明書Timentin 特美?。ㄐ滦透锾m氏陰性菌抗生素) 3.2g LB肉湯顆粒
白花前胡素 HPLC≥98% Praeruptorin A 人體肝癌細胞,YY8103細胞 用于含量測定
大薊苷 20mg Pectolinarin ELISAKitforHumanC-X-Cmotifchemokine16
黃曲素 G2 AFLATOXIN G2(RG) 10mg ELISAKitforTestosterone
5-溴尿嘧啶 5-Bromouracil >98.0%(T) 25G ELISAKitforHumanStromelysin-1
棕櫚酸 palmitic acid KLK13/Kallikrein13抗體,兔單抗 ≥98%
對羥基苯酸異丁酯 100mg 0.993 IL-1RA/IL1RN抗體,兔單抗
枸櫞酸;檸檬酸 20mg Citric Acid ELISAKitforAcetylcholine HPLC≥98%